ICSI con sperma trattato VS ICSI con sperma swim-out

ICSI con sperma trattato VS ICSI con sperma swim-out

Introduzione

La preparazione dello sperma è una pratica comune nei laboratori di riproduzione assistita. Numerosi studi dimostrano un miglioramento della qualitá degli spermatozoi dopo averli sottomessi a tecniche come il gradiente di densitá che permette di selezionare spermatozoi con migliore mobilitá e morfologia. Inoltre queste tecniche sono necessarie per separare gli spermatozoi dal plasma seminale permettendo la capacitazione spermatica, attivandoli per fecondare l’ovocito maturo.

Una nuova tecnica denominata Swim-out consiste nel porre direttamente il campione di sperma del paziente in PVP nella piastra di ICSI senza sottomettere il campione a nessun tipo di trattamento: gli spermatozoi sono quindi selezionati direttamente dall’eiaculato.

Obbiettivi

L’obbiettivo di questo studio è verificare se esistono differenze nelle percentuali di fecondazione, sviluppo e B-HGC positive, microiniettando spermatozoi trattati con gradiente di densitá o spermatozoi Swim-out.

Materiali e metodi

Lo studio è stato realizzato su 24 pazienti riceventi ovociti da donante e campioni di seme da coppia con normozoospermia. Sono stati microiniettati 97 MII con sperma trattato e 94 MII con sperma Swim-out

I campioni di sperma erano stati raccolti tra agosto 2016 e marzo 2017. In tutti sono stati analizzati i parametri basici di volume, concentrazione e mobilitá.

Prima del trattamento abbiamo separato un minimo volume di campione in un tubo Falcon® di 5ml. Il resto dei campioni di sperma sono stati preparati usando Supra Sperm 100% (Origio Medicult) previamente diluito con SpermaWashing (Sage) per ottenere una concentrazione di un 40% e 80%

Le colonne sono state preparate in tubi Falcon® da centrifuga usando una frazione di 2ml di gradiente all’80%, un’altra frazione di 2ml di gradiente al 40% e infine una frazione di 2ml di campione di sperma. La colonna è stata centrifugata a 1600 rpm per 15 minuti a temperatura ambiente. Dopo la centrifugazione, il pellet è stato lavato in 2 ml di Sperm Washing (Sage) seguito da una centrifugazione di 1800 rpm per 10 minuti. Infine, è stato ritirato il supernatante ed è stato risospeso il pellet in 0,5 ml in mezzo Fert (Origio Medicult) previamente gassificato (6% CO2, 37ºC) 12 ore.

Sono state preparate le placche di ICSI (Falcon®) con due linee di PVP al 7% (SAGE). In una delle linee nella parte superiore si è depositata un’aliquota del seme capacitato e nell’altra linea di PVP nella parte superiore è stato depositato lo sperma senza essere trattato.

La metá degli ovuli in metafase 2 della donante è stata iniettata con spermatozoi che provenivano dal campione di sperma trattato con il gradiente di densitá e l’altra metá è stata microiniettata con spermatozoi Swim-out.

18 ore dopo l’inseminazione si verificó la corretta fecondazione degli ovociti (2 pronuclei e due corpi polari).

Gli zigoti sono stati coltivati fino allo stadio di blastocisti in mezzo unico (1-STEP, OrigioMedicult). Nella 5ª giornata sono stati classificati e selezionati per il loro trasferimento e/o congelamento.

Risultati

I nostri risultati dimostrano che il tasso di fecondazione rimane per lo piú invariato tanto con l’uso di sperma trattato come con sperma swim-out. Nonostante ció, i tassi di blastulazione e di B-Hcg positive per trasferimento sono piú elevate quando usiamo sperma trattato con gradiente di intensitá per realizzare la microiniezione degli ovociti maturi.

Conclusioni

Secondo i nostri risultati, c’e un’abbassamento della percentuale di bastulazione e di gravidanza (B-Hcg per trasferimento) quando usiamo la tecnica del Swim-out.

Trattando i campioni di sperma con gradienti di densitá selezioniamo spermatozoi con migliori caratteristiche, migliore mobilitá e morfologia oltre a favorire la capacitazione spermatica attivando la reazione acrosomiale che è fondamentale per la fecondazione degli ovociti. Per cui sembra raccomandabile trattare sempre lo sperma che useremo nella fecondazione degli ovociti per ottimizzare i risultati nei trattamenti di FIV.

Autori: E. Criado, C. González (FIV Marbella e Ovobank)

Studio ammesso per l’esibizione in ASEBIR 2017

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